Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Mycoplasma spp. em gatos domésticos / Epidemiological aspects of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Mycoplasma spp. in domestic cats

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys., e Mycoplasma spp., torna-se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de gatos advindos de consultas no Hospital Veterinário Mário Dias Teixeira (HOVET) que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de gatos domésticos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais e grupos etários. De todos os animais testados, 34,7% obtiveram diagnóstico positivo para uma das enfermidades, sendo o gênero Mycoplasma spp. o que mais prevaleceu em amostras positivas, com maior frequência em fêmeas adultas, bem como foi descrita ocorrência de E. canis apenas nesse sexo, já A. platysfoi descrito com maior frequência em machos, além de achados de infecções concomitantes observado entre os agentes Anaplasmae Mycoplasma. Concluímos que os gatos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

Hemoparasitosis have become increasingly important in the small animals' internal medicine. Among the causal agents, there are Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys. and Mycoplasma spp., which give the understanding of the epidemiology in domestic cats a great significance. This research aimed to make a retrospective survey of records from cats that came from appointments at the Veterinary Hospital Mário Dias Teixeira (HOVET) and underwent the Polymerase Chain Reaction (PCR) test at the molecular biology laboratory, at the Amazônia Federal Rural University (UFRA), in the years of 2018 and 2019. In total, 72 samples of domestic cats were processed, from which 33 were males and 39 females, 70 of them were mongrel cats and 2 siamese, all of them showed thrombocytopenia amongst other clinical signs that led them to need a veterinary appointment, the months of admission, processing of the samples, districts the animals came from and age group were categorized. 34,7% of all the animals tested showed positive results for one of the diseases, with the genus Mycoplasma spp. being the most prevalent in positive samples, showing a higher rate in adult females, as the occurrence of E. canis was reported only in females, while A. platys was reported with a higher rate in males, as well as concomitant infections following the observation of the agents Anaplasma and Mycoplasma. In conclusion, the cats admitted at HOVET showed parasitism by different infectious agents.

Proposal of an iELISA for Mycoplasma bovis diagnosis in dairy cattle and associated risk factors / [Proposta de um iELISA para diagnóstico de Mycoplasma bovis em bovinos leiteiros e fatores de risco associados]

Mycoplasma bovis is a highly contagious agent associated with several pathologies in cattle. The detection of reactive antibodies to M. bovis by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) identifies if there was an exposure to the microorganism. The current study aimed to optimize an iELISA from M. bovis total cell antigen, applying it to bovine serum samples, and to evaluate risk factors. Serum samples were obtained from 400 cows from 17 herds from Southeast Brazil. In the optimization of iELISA, the following was established: 2 µg/mL of antigen, sera dilution 1:300, and conjugate dilution 1:15000. The frequency was 62.3% (249/400) of reactive animals and 100% (17/17) of reactive herds. Risk factors were: herds with more than 100 animals (OR= 3.1; CI= 95%); Holstein breed (OR= 72.5; CI= 95%); cows (OR= 29.7; CI= 95%); intensive breeding system (OR= 3.3; CI= 95%); associated small ruminant production (OR= 4.4; CI= 95%); milk production above 500L (OR= 2.9; CI= 95%); no quarantine (OR= 1.5; CI= 95%); mechanical milking (OR= 5.5; CI= 95%) and cases of mastitis (OR= 5.5; CI= 95%). The proposed iELISA was able to detect antibodies reactive to M. bovis in bovine serum. Knowledge of these risk factors can assist in the implementation of prophylactic measures.(AU)

Mycoplasma bovis é um agente altamente contagioso relacionado a várias patologias em bovinos. A detecção de anticorpos reativos a M. bovis por Ensaio de Imunoadsorção Enzimática Indireto (iELISA) identifica se houve exposição ao microrganismo. O presente estudo teve como objetivo otimizar um iELISA de antígeno celular total de M. bovis, aplicando-o a amostras de soro bovino, bem como avaliar fatores de risco. Amostras de soro foram obtidas de 400 vacas de 17 rebanhos da Região Sudeste do Brasil. Na otimização do iELISA foram obtidos: 2µg/mL de antígeno, diluição dos soros 1:300 e do conjugado 1:15000. A frequência de animais reativos foi de 62,3% (249/400) e de 100% (17/17) para os rebanhos. Os fatores de risco foram: rebanhos com mais de 100 animais (OR= 3,1; IC= 95%); raça Holandesa (OR= 72,5;IC= 95%); vacas (OR= 29,7;IC= 95%); sistema intensivo (OR= 3,3; C= 95%); produção de pequenos ruminantes (OR= 4,4;IC=95%); produção de leite acima de 500L (OR= 2,9;IC= 95%); sem quarentena (OR= 1,5;IC= 95%); ordenha mecânica (OR= 5,5;IC= 95%) e casos de mastite (OR= 5,5;IC= 95%). O iELISA proposto foi capaz de detectar anticorpos reativos a M. bovis no soro bovino. O conhecimento desses fatores de risco pode auxiliar na implementação de medidas profiláticas.(AU)

'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' and tick-borne pathogens screening in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Curitiba and Foz do Iguaçu Cities, Paraná State, southern Brazil / 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' e triagem para patógenos transmitidos por carrapatos em gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) das cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, Estado do Paraná, sul do Brasil

Abstract Hemoplasmas are epierythrocytic bacteria that infect mammals. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' was detected in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from southern and central-western Brazil. The present study aimed at: i) screening opossums for tick-borne (TBP) pathogens (Piroplasmida and Anaplasmataceae) and ii) detecting and characterizing hemoplasma species infecting opossums from Curitiba and Foz do Iguaçu cities in the Paraná State, southern Brazil. Thirty blood samples from white-eared opossums were evaluated by PCR assays. Animals were not infested by ectoparasites. The mammalian endogenous gapdh gene was consistently amplified in all samples. All opossums tested negative for Theileria/Babesia spp. and Ehrlichia/Anaplasma spp. by PCR based on 18S rRNA and 16S rRNA genes, respectively. A genus-specific PCR assay based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas showed that three/13 (23.08%; CI 95%: 8.18-50.26%) opossums from Foz do Iguaçu were positive for hemotropic Mycoplasma sp. All opossums from Curitiba tested negative for hemoplasmas. Sequencing of both the 16S and 23S rRNA genes revealed that the animals were infected by 'Ca. M. haemoalbiventris'. Although 'Ca. M. haemoalbiventris' is prevalent in opossums in Brazil, clinical signs associated with its infection and its putative vectors remain unknown.

Resumo Hemoplasmas são bactérias epieritrocíticas que infectam mamíferos. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' foi detectado previamente em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) das regiões sul e centro-oeste do Brasil. O presente estudo objetivou: i) triar os gambás para as doenças transmitidas por carrapatos (Piroplasmida e Anaplasmataceae); e ii) detectar e caracterizar as espécies de hemoplasma que infectam gambás nas cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Trinta amostras de sangue de gambás-de-orelha-branca foram analisadas por PCR. Os animais não estavam infestados por ectoparasitos. O gene endógeno de mamífero gapdh foi amplificado em todas as amostras. Todos os gambás testaram negativos para Theileria/Babesia spp. e Ehrlichia/Anaplasma spp. por PCR, respectivamente, para os genes 18S rRNA e 16S rRNA. Uma PCR gene-específica, baseada no gene 16S rRNA de hemoplasmas, mostrou que três/13 (23,08%; CI 95%: 8,18-50,26%) gambás de Foz do Iguaçu foram positivos para Mycoplasma sp. hemotrópico. Todos os gambás de Curitiba testaram negativos para hemoplasmas. O sequenciamento de fragmentos dos genes 16S e 23S rRNA revelou que os animais estavam infectados pelo 'Ca. M. haemoalbiventris'. Embora 'Ca. M. haemoalbiventris' seja prevalente em gambás no Brasil, os sinais clínicos associados à infecção e os prováveis vetores permanecem desconhecidos.

Microbiological and molecular detection of Mycoplasma bovis in milk samples from bovine clinical mastitis / Detecção microbiológica e molecular de Mycoplasma bovis em amostras de leite oriundas de mastite clínica bovina

The genus Mycoplasma includes more than 200 bacterial species that cause disease in animals. It is responsible for causing mastitis in bovines and may be related to other manifestations, such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The present study aimed to detect Mycoplasma bovis isolated from milk samples of bovine clinical mastitis, and to compare the isolation rates in two culture media: Hayflick and SP4. An initial screening was performed in order to detect the presence of the class Mollicutes in 1166 milk samples from clinical mastitis by the conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. According to the 1166 milk samples evaluated, 8.6% (100/1166) were positive to class Mollicutes. Regarding molecular analyses, 1.1% (13/1166) of conventional PCR for positive M. bovis was obtained and 0.9% (11/1166) in real-time PCR. The results of the microbiological culture of the 100 samples previously screened demonstrated that 6% (6/100) of colony growth have been developed when using the Hayflick medium, and 11% (11/100) when using the SP4 medium (including the positive on Hayflick medium). Concerning the 11 isolates obtained in the microbiological culture, conventional PCR confirmed M. bovis in nine of them, and two cultures were negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, all of them were grouped in M. bovis and M. agalactiae clusters. The results confirmed the importance of the presence of M. bovis in the etiology of bovine clinical mastitis and reinforced the need for further studies to elucidate other Mycoplasma species that may be involved in bovine clinical mastitis in Brazil.(AU)

O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies que causam doenças nos animais. É responsável por quadros de mastite em bovinos, podendo também estar relacionado à outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. O presente estudo objetivou a detecção de Mycoplasma bovis isolados a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a comparação da taxa de isolamento em dois meios de cultura: Hayflick e SP4. Para efeito de triagem amostral, foram avaliadas quanto à presença da classe Mollicutes 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica pela técnica de PCR convencional. Das 1166 amostras de leite avaliadas, 8,6% (100/1166) foram positivas à classe. Nas análises moleculares, obteve-se 1,1% (13/1166) de positividade para Mycoplasma bovis na PCR convencional e 0,9% (11/1166) na PCR em tempo real. Os resultados do cultivo microbiológico das 100 amostras triadas previamente demonstraram 6% (6/100) de crescimento de colônias ao se utilizar o meio Hayflick e 11% (11/100) ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir dos 11 isolados obtidos no cultivo microbiológico, a PCR convencional confirmou Mycoplasma bovis em nove deles, e dois foram negativos para o agente. Na análise filogenética dos isolados, todos agruparam no cluster Mycoplasma bovis e Mycoplasma agalactiae. Frente aos resultados, ressalta-se a importância da presença de Mycoplasma bovis na etiologia da mastite clínica bovina e reforça a necessidade de estudos mais aprofundados para a elucidação de outras espécies de micoplasmas que possam estar envolvidas na mastite bovina.(AU)

Bacteria isolated from the lower respiratory tract of sheep and their relationship to clinical signs of sheep respiratory disease / Bactérias detectadas no trato respiratório inferior de ovinos e a relação com as manifestações clínicas da doença respiratória ovina

Respiratory diseases are among the most important diseases in sheep flocks. Herein was studied the bacterial etiology of respiratory disease and the clinical signs of 99 female and male sheep breed in the states of São Paulo (SP) and Rio de Janeiro (RJ), Brazil. After physical examination of animals, tracheobronchial flushing samples were obtained. The usual bacteria and Mycoplasma spp. were searched, as well as their association with the clinical status and clinical signs of sheep with respiratory disease. The main observed signs were: tachypnea (75%), increase of rectal temperature (09.4%), mucopurulent/purulent nasal discharge (21.9%), cough (25%), dyspnea (31.2%), changes of lung sounds at auscultation (87.5%) and chest percussion (28.1%) in pneumonic sheep. Non-fermenting gram-negative bacteria and Bacillus sp. were the most isolated bacteria. Microorganisms of the Mollicutes class were molecularly (PCR) detected in 33.3% of the animals. In addition, the specific detection of M. mycoides subsp. capri was described for the first time in sheep from the state of São Paulo, Brazil.(AU)

A doença respiratória é uma das doenças mais importantes em rebanhos ovinos. Esta pesquisa teve como objetivo determinar a etiologia bacteriana da doença respiratória e sua relação com sinais clínicos em ovinos criados nos estados de São Paulo e Rio de Janeiro, Brasil. Noventa e nove ovelhas machos e fêmeas dos Estados de São Paulo (SP) e Rio de Janeiro (RJ) foram estudadas. Após o exame físico, amostras de lavagem traqueobrônquica foram obtidas. A presença de bactérias aeróbias e Mycoplasmaspp. foram estudados, assim como a associação entre os microrganismos e estado clínico e sinais clínicos de doença respiratória em ovinos. As principais manifestações clínicas observadas foram: taquipneia (75%), alta temperatura retal (09,4%), secreção nasal mucopurulenta/purulenta (21,9%), tosse (25%), dispneia (31,2%), sons pulmonares alterados na ausculta (87,5%) e na percussão torácica (28,1%) em ovelhas pneumônicas. Bactérias gram-negativas não fermentadoras e Bacillus sp. foram as bactérias mais isoladas. Microrganismos da classe Mollicutes foram detectados molecularmente (PCR) em 33,3% dos ovinos. Além disso, descreve-se pela primeira vez no estado de São Paulo, Brasil, a detecção do M. mycoides subsp. capri na espécie ovina utilizando a reação de polimerase em cadeia.(AU)

First molecular detection of Mycoplasma ovis (Hemotropic mycoplasmas) from Sheep in Brazil / Primeira detecção molecular de Mycoplasma ovis (Micoplasmas Hemotrópicos) em Ovinos no Brasil

Abstract Mycoplasma ovis is an emerging zoonotic pathogen with a worldwide distribution and can cause mild to severe hemolytic anemia, icterus, and poor weight gain in animals. Although M. ovis has been described in small ruminants worldwide, data on M. ovis in sheep in Brazil is unknown. The objective of the present study was to present the first report of hemotropic mycoplasma (HM) in sheep from Brazil. We evaluated factors associated with this infection, such age group, tick presence, and anemia. Blood samples were collected from 33 sheep from a farm in southern Brazil and screened for hemoplasmas using PCR. Out of 33 samples, 26 (78.8%) tested positive for M. ovis. The sequencing of positive samples showed 100% identity with multiple M. ovis 16S rDNA sequences. No association was observed between the presence of M. ovis and the FAMACHA© score (p = 0.620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45.4%) was the tick species found on the animals. No significant association between M. ovis infection and presence of ticks (p = 0.4134) and age group (p = 0.4221) was observed. This is the first report of M. ovis infection in sheep from Brazil and only the second report of this pathogen in sheep in Latin America.

Resumo Mycoplasma ovis é um patógeno zoonótico emergente com distribuição mundial e pode causar anemia hemolítica de leve a grave, icterícia e baixo ganho de peso em animais. Embora M. ovis tenha sido descrito em pequenos ruminantes em todo o mundo, os dados sobre M. ovis em ovinos no Brasil são desconhecidos. O objetivo deste estudo foi apresentar o primeiro relato de micoplasmas hemotrópicos em ovinos no Brasil. Avaliamos os fatores associados a essa infecção, como faixa etária, presença de carrapatos e anemia. Amostras de sangue foram coletadas de 33 ovelhas de uma fazenda no sul do Brasil e testadas para hemoplasmas usando a PCR. Das 33 amostras, 26 (78,8%) apresentaram resultado positivo. O sequenciamento das amostras positivas mostrou 100% de identidade com múltiplas sequências de M. ovis 16S rDNA. Não foi observada associação entre a presença de M. ovis e o escore FAMACHA© (p = 0,620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45,4%) foi a espécie de carrapato encontrada nos animais. Não houve associação significativa entre infecção por M. ovis e presença de carrapatos (p = 0,4134) e faixa etária (p = 0,4221). Este é o primeiro relato de infecção por M. ovis em ovinos no Brasil e o segundo relato deste patógeno em ovinos na América Latina.

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Abstract Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.

Resumo Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.

Ocurrence and risk factors associated with Mycoplasma agalactiae infection in dairy goat herds of Paraíba State, Brazil / Ocorrência e fatores de risco associados à infecção por Mycoplasma agalactiae em rebanhos caprinos leiteiros do estado da Paraíba, Brasil

Mycoplasmosis is a disease that may cause severe economical losses in goat and sheep herds, and it is associated with mastitis, polyarthritis, agalactia, conjunctivitis, pneumonia and reproductive failure. The objective of this study was to determine the occurrence of Mycoplasma agalactiae in milk samples and investigate the main risk factors associated with infection in goats from farms of the state of Paraíba, Brazil. For Mycoplasma agalactiae diagnosis, 251 milk samples were submitted to DNA extraction using a commercially available kit, following the manufacturer's instructions and Polymerase Chain Reaction (PCR) was performed. In addition, questionnaires were applied to identify the main risk factors associated with contagious agalactia. Out of the two hundred fifty-one samples analyzed, 50 (19.9%, I.C. 15.1-25.4%) were PCR positive for M. agalactiae. In the risk factors analysis, some associations were observed for the following variables: size of the herd (P<0.001, OR=7.1, I.C. 2.4-20.6), replacement of farm animals (P<0.001, OR=4.7, I.C. 1.8-12.2) and participation of animals in fairs and exhibitions (P=0.029, OR=2.0, I.C.1.0-3.9). The results allowed confirming the occurrence of Mycoplasma agalactiae in milk samples of goats from Paraíba. Therefore, it is strictly necessary to monitor dairy goat flocks and to raise the awareness of farmers about the economic importance of the disease, since it causes severe economic losses for producers of the state. Identification of risk factors is essential for adoption of control measures and for the correction of the management factors in farms where there are animals with positive diagnosis, avoiding, so, pathogen dissemination.(AU)

As micoplasmoses ocasionam prejuízos econômicos nas criações de ovinos e caprinos, e estão associados com quadros de mastite, poliartrite, agalaxia, conjuntivite, pneumonia e falhas reprodutivas. Objetivou-se neste estudo determinar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae em amostras de leite e investigar os principais fatores de risco associados à infecção em caprinos provenientes de propriedades rurais do estado da Paraíba, Brasil. Para o diagnóstico de Mycoplasma agalactiae, foram analisadas 251 amostras de leite, que foram submetidas à extração do DNA genômico usando um kit comercial, seguindo as recomendações do fabricante. Para diagnóstico da infecção utilizou-se a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Além disso, foram aplicados questionários para identificar os principais fatores de risco associados infecção à agalaxia contagiosa. Das 251 amostras analisadas, 50 (19,9%; I.C. 15,1-25,4%) foram positivas na PCR para M. agalactiae. Observaram-se na análise dos fatores de risco, algumas associações para as seguintes variáveis: tamanho do rebanho (P<0,001; OR 7,1), reposição de animais da propriedade (P<0,001; OR 4,7) e participação dos animais em feiras e exposições (P= 0,029; OR 2,0). Os resultados permitiram confirmar a ocorrência do Mycoplasma agalactiae em amostras de leite de caprinos da Paraíba. Portanto, é necessário o monitoramento dos rebanhos caprinos leiteiros e a conscientização dos produtores rurais para a importância econômica da doença, visto que a mesma acarreta severos prejuízos econômicos para os produtores do estado. A identificação dos fatores de risco são imprescindíveis para a adoção de medidas de controle e para a correção dos fatores de manejo em propriedades que tenham animais com diagnóstico positivo, evitando assim, a disseminação do patógeno.(AU)

Hemotropic mycoplasmas in naturally infected cats in Northeastern Brazil / Micoplasmas hemotróficos em gatos naturalmente infectados no Nordeste do Brasil

Abstract This study aimed to determine the prevalence, factors associated, laboratory findings (with and without coinfection by retroviruses) among naturally infected cats by hemoplasmas in northeastern Brazil. For convenience, 200 domesticated and healthy cats were selected. Blood samples were taken to perform complete blood counts, serum biochemical, immunochromatography tests and nPCR for FIV and FeLV, and PCR for hemoplasma recognition. An interview was conducted to determine the factors associated with hemoplasmas. A total of 71/200 (35.5%) cats were positive for at least one hemoplasma species. Isolated infections were observed in 12,5% for 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% for Mycoplasma haemofelis and 3% for 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Regarding copositivity, 2% of the animals were positive for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1.5% for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma turicensis', and 4.5% for ' Candidatus Mycoplasma haemominutum' and 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. No clinical and laboratory changes were observed in the animals that were concomitantly positive for retroviruses and hemoplasmas. Periurban region cats were more likely to be infected by M. haemofelis, while contact with other cats and infection by ' Candidatus Mycoplasma turicensis' were associated with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. This study indicates that infection by hemoplasmas is a common find in cats from northeastern Brazil.

Resumo Objetivou-se com este estudo determinar a prevalência, fatores associados, achados laboratoriais (com e sem coinfecção com retrovírus) em gatos naturalmente infectados por hemoplasmas no Nordeste do Brasil. Selecionou-se, por conveniência, 200 gatos domiciliados, hígidos, sendo colhidas amostras de sangue para realização do hemograma, bioquímica sérica, imunocromatografia e nested-PCR para FIV e FeLV, e PCR para identificação dos hemoplasmas. Uma entrevista foi realizada para determinação dos fatores associados aos hemoplasmas. A frequência de positividade foi de 35,5% (71/200). Infecções isoladas foram observadas em 12,5% dos animais para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% para Mycoplasma haemofelis e 3% para 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Quanto a co-positividades, 2% dos animais foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1,5% foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma turicensis', e 4,5% foram positivos para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' e 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Não foram observadas alterações clínicas ou laboratoriais nos animais positivos para retrovírus e hemoplasmas, concomitantemente. A região periurbana foi identificada como fator de risco associado a M. haemofelis. Enquanto o contato com outros gatos e a infecção por 'Candidatus Mycoplasma turicensis' foi associado à 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. Este estudo indica que a presença dos agentes da micoplasmose hemotrópica felina é comum no Nordeste brasileiro.

Identificación de especies de Mycoplasma y de Ureaplasma diversum en rodeos lecheros de Argentina / Identification of species of Mycoplasma and Ureaplasma diversum from Argentinian dairy herds

Varias especies de Mycoplasma y Ureaplasma diversum pueden causar enfermedades en el ganado bovino lechero, asociadas o no a manifestaciones clínicas. En nuestro país, ha sido detectada la presencia de solo tres especies de este grupo hasta el momento: Mycoplasma bovis, Mycoplasma californicum y Mycoplasma canadense. El objetivo del presente trabajo fue identificar otras especies de la familia Mycoplasmataceae. Se estudiaron treinta y cinco aislamientos compatibles con Mycoplasma spp. obtenidos a partir de diferentes muestras de bovinos, con o sin sintomatología clínica, provenientes de ocho rodeos ubicados en las provincias de Santa Fe, Córdoba, Buenos Aires y San Luis. Mediante el uso de reacciones en cadena de la polimerasa (PCR) específicas de especie se identificaron Mycoplasma bovigenitalum, Mycoplasma alkalescens, Mycoplasma bovirhinis y U. diversum, y mediante la amplificación y posterior secuenciación del espacio intergénico 16-23S ARNr se identificaron Mycoplasma arginini y M. californicum. La identificación de estas especies por primera vez en nuestro país es un hecho de Argentina relevancia, que representa un importante avance en el conocimiento para incluir estos patógenos en el diagnóstico diferencial de determinadas entidades clínico-patológicas de los bovinos de Argentina.

Several species of Mycoplasma and Ureaplasma diversum can cause diseases in dairy cattle, which can be associated or not with clinical manifestations. In our country, the presence of Mycoplasma bovis, Mycoplasma californicum and Mycoplasma canadense has been detected, being the only mycoplasma species identified so far. The objective of this study was to identify other species of the Mycoplasmataceae family. Thirty-five Mycoplasma spp.-like isolates obtained from different samples from cattle, with or without clinical symptoms, from eight herds located in the provinces of Santa Fe, Cordoba, Buenos Aires and San Luis were utilized in the present study. Through the use of species-specific polymerase chain reactions (PCR) Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma alkalescens, Mycoplasma bovirhinis and U. diversum were identified and through amplification and further sequencing of the 16-23S rRNA intergenic spacer regions, Mycoplasma arginine and M. californicum were identified. The identification of these species represents an important advance in knowledge in order to include these pathogens in the differential diagnosis of certain clinical and pathological entities of cattle from Argentina.

Identification of subclinical mastitis caused by Mycoplasma spp. from screenings of bulk tanks / Identificação de mastite subclínica causada por Mycoplasma spp. de triagem de tanques de expansão

Mastitis caused by Mycoplasma spp., regardless of species, are considered highly contagious pathogens and, usually was not responsive to antimicrobial therapy. Five dairy herds, comprising 489 animals and 1,956 mammary glands, were used in this study. Milk samples were obtained from bulk tanks and subjected to polymerase chain reaction (PCR) for the identification of Mollicutes, Mycoplasma spp., and Mycoplasma bovis. Moreover, individual samples from cases of clinical and subclinical mastitis in quarters of the dairy herds' animals that yielded a positive PCR upon bulk tank analysis were subjected to molecular analysis. Only one bulk tank was positive for class Mollicutes by PCR. All positive samples classified as mastitis teats had their DNA extracted and tested by PCR for both class Mollicutes and M. bovis. Of these, two (2.08%) were positive for Mycoplasma genus, although none was positive for M. bovis. This result suggests that the PCR of bulk tanks is a viable tool in monitoring and preventing mastitis infections caused by Mycoplasma spp.(AU)

Mastites bovinas causadas por Mycoplasma spp., independentemente da espécie causadora, são consideradas de alta contagiosidade e geralmente não responsivas à terapia antimicrobiana. Cinco propriedades leiteiras foram utilizadas neste estudo, totalizando 489 animais e 1956 quartos mamários. As amostras de leite foram obtidas de tanques de expansão e submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para pesquisa de Mollicutes, Mycoplasma spp. e Mycoplasma bovis. Apenas um tanque de uma propriedade foi positivo na PCR para a classe Mollicutes. Amostras individuais de casos de mastite subclínica provenientes de propriedade com tanque positivo também foram submetidas à análise molecular; dessas, duas delas (2,08%) foram positivas para a classe Mollicutes e para o gênero Mycoplasma, entretanto nenhuma foi positiva para a espécie Mycoplasma bovis. Isso sugere que a PCR de tanques de expansão de propriedades leiteiras demonstra ser uma ferramenta viável no monitoramento e na prevenção de infecções por Mycoplasma spp.(AU)

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

High occurrence of Mycoplasma suis infection in swine herds from non-technified farms in Mossoró, state of Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil / Alta ocorrência de infecção por Mycoplasma suis em suínos de criações não tecnificadas de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte, Nordeste brasileiro

Abstract Mycoplasma suis, the etiological agent of swine hemoplasmosis, has been neglected in swine herds around the world. Swine hemoplasmosis is frequently associated with hemolytic anemia, disgalacty, infertility and immunosuppression, and it results in significant economic losses. This study investigates the occurrence of M. suis in non-technified swine herds in the northeastern region of Brazil using quantitative PCR (qPCR) based on the 16S rRNA gene. Between March and August 2013, blood samples from 147 swine were collected during slaughter in the city of Mossoró, state of Rio Grande do Norte, northeastern Brazil. One hundred and twelve samples (76.19%) were positive for M. suis by qPCR assays. The range of Cqs and quantification (copies of a M. suis-16S rRNA gene fragment/µL) was 20.86–37.89 and 1.64×101–6.64×107, respectively. One can conclude that M. suis infection have high occurrence (76,19%) in non-technified swine-rearing systems in Mossoró in the state of Rio Grande do Norte, Brazil.

Resumo Mycoplasma suis, agente etiológico da hemoplasmose suína, tem sido negligenciado nas criações de suínos ao redor do mundo. A hemoplasmose suína é frequentemente associada à anemia hemolítica, disgalactia, infertilidade e imunossupressão, acarretando em perdas econômicas. O objetivo do presente trabalho foi investigar, por meio da PCR quantitativa (qPCR) baseada no gene rRNA 16S, a ocorrência de M. suis em amostras de sangue de suínos de criações não tecnificadas na cidade de Mossoró, Estado do Rio Grande do Norte. Entre março a agosto de 2013, foram colhidas amostras de sangue de 147 suínos de criações não tecnificadas da referida região. Cento e doze amostras (76,19%) amostras mostraram-se positivas na qPCR para M. suis. A média dos Cqs e da quantificação (número de cópias do gene 16S rRNA de M. suis por microlitro) foi de 20,86 – 37,89 e 1,64 x 101 a 6,64 x 107, respectivamente. Conclui-se que a infecção por M. suis apresenta alta ocorrência (76,19%) em criações de suínos não tecnificadas na cidade de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte.

Hematological changes associated with hemoplasma infection in cats in Rio de Janeiro, Brazil / Alterações hematológicas associadas à infecção por hemoplasmas em gatos do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract This study aimed to detect Mycoplasma spp. in naturally infected cats from Rio de Janeiro and to evaluate hematological abnormalities and factors associated with this infection. Out of the 197 cats sampled, 11.2% presented structures compatible with hemoplasma organisms on blood smears. In contrast, 22.8% were positive for Mycoplasma spp. by means of 16S rRNA gene real-time polymerase chain reaction, which reflects the weak concordance between techniques. The infection rates, by means of 16S rRNA gene conventional polymerase chain reaction, was 4.6%, 4.6% and 11.7% for Mycoplasma haemofelis (Mhf), ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ (CMt) and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm), respectively. Mhf and CMhm infections are more frequent in the summer (p>0.05). Presence of anemia (p < 0.02), lymphocytosis (p < 0.03), thrombocytopenia (p < 0.04) and activated monocytes (p < 0.04) was associated with Mhf infection. No hematological abnormality was associated with CMt or CMhm infection. Male cats were more prone to be infected by Mhf or CMhm (p < 0.01). Adult cats had more chance to be infected by CMhm. Three hemoplasma species occur in the metropolitan region of Rio de Janeiro and Mhf seems to be the most pathogenic of them. Anemia is the most important hematological abnormality.

Resumo Este estudo teve por objetivo detectar Mycoplasma spp. em gatos naturalmente infectados do Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas e fatores associados à infecção. Dos 197 gatos amostrados, 11,2% apresentaram estruturas compatíveis com hemoplasmas em esfregaços de sangue. Em contraste, 22,8% foram positivas para Mycoplasma spp. por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), baseado no gene 16S rRNA, o que reflete a fraca concordância entre as técnicas. As taxas de infecção, por meio da reação em cadeia da polimerase convencional baseada no gene 16S rRNA, foi de 4,6%, 4,6% e 11,7% para Mycoplasma haemofelis (Mhf), 'Candidatus Mycoplasma turicensis' (CMt) e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' (CMhm), respectivamente. Infecção por Mhf e CMhm foram mais frequentes no verão (p> 0,05). Anemia (p<0,02), linfocitose (p<0,03), trombocitopenia (p<0,04), e presença de monócitos ativados (p<0,04) foram associados à infecção por Mhf. Nenhuma alteração hematológica foi associada à infecção por CMt ou CMhm. Gatos machos estão mais propensos à infecção por Mhf ou CMhm (p<0,01). Gatos adultos têm maiores chances de se infectarem por CMhm. Há ocorrência de três espécies de hemoplasmas na Região Metropolitana do Rio de Janeiro e Mhf parece ser o mais patogênico, tendo a anemia como principal alteração hematológica.

Occurrence of Mycoplasma haemocanis in dogs infested by ticks in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Ocorrência de Mycoplasma haemocanis em cães infestados por carrapatos em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

Abstract Hemotropic mycoplasmas in dogs, such as Mycoplasma haemocanis, have been described worldwide. Recently, these pathogens have been reported to be causative agent of zoonosis. It is known that its transmission may occur through the action of blood-sucking arthropods (e.g. ticks or fleas), through blood transfusion, contaminated fomites and/or transplacentally. In Brazil, M. haemocanis is present in practically all regions and the tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato is suspected the main vector. In the municipality of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, there is little information about infection of dogs by M. haemocanis, or on the main epidemiological features associated with it. Thus, the aim of the present study was to determine the occurrence of M. haemocanis among dogs infested by ticks and to assess possible associations with some epidemiological factors. The polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing were used to analyze dog blood samples (n = 94). DNA from M. haemocanis was detected in four samples. No significant associations were observed with any epidemiological parameter analyzed here. However, the results from this study confirm that this pathogen is circulating in this region and should be considered in the differential diagnosis of diseases among anemic dogs.

Resumo Micoplasmas hemotrópicos de cães, como Mycoplasma haemocanis, já foram descritos em todo o mundo. Recentemente, esses patógenos têm sido apontados como causadores de zoonoses. É sabido que a transmissão pode ocorrer devido à ação de artrópodes sugadores de sangue (carrapatos, pulgas), transfusão sanguínea e/ou fômites contaminados e por via transplacentária. No Brasil, Mycoplasma haemocanis está presente em praticamente todas as regiões, e o carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato é suspeito como principal vetor. No município de Campo Grande, Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil não existem muitas informações acerca de infecções de cães por M. haemocanis, assim como quais são os principais aspectos epidemiológicos associados a este patógeno. Assim, o objetivo, no presente estudo, foi determinar a ocorrência de M. haemocanis em cães infestados por carrapatos e analisar possíveis associações com alguns fatores epidemiológicos. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e o sequenciamento de DNA foram utilizados para analisar amostras de sangue de cães (n = 94). DNA de M. haemocanis foi identificado em quatro amostras. Não foram observadas associações significativas com qualquer parâmetro epidemiológico analisado. No entanto, os resultados deste estudo confirmam que esse patógeno está circulando na região e deve ser considerado no diagnóstico diferencial de causas de anemia em cães.

Molecular investigation of hemotropic mycoplasms in human beings, dogs and horses in a rural settlement in Southern Brazil / Investigação molecular de espécies de micoplasmas hemotrópicos em cães, equinos e humanos de um assentamento rural do Sul do Brasil

SUMMARYThe aims of this study were to determine the prevalence of hemoplasmas in a rural Brazilian settlement's population of human beings, their dogs and horses, highly exposed to tick bites; to identify the tick species parasitizing dogs and horses, and analyze factors associated with their infection. Blood samples from 132 dogs, 16 horses and 100 humans were screened using a pan-hemoplasma SYBR green real-time PCR assay followed by a species-specific TaqMan real-time PCR. A total of 59/132 (44.7%) dog samples were positive for hemoplasmas (21 Mycoplasma haemocanisalone, 12 ' CandidatusMycoplasma haematoparvum' alone and 21 both). Only 1/100 (1.0%) human sample was positive by qPCR SYBR green, with no successful amplification of 16S rRNA or 23 rRNA genes despite multiple attempts. All horse samples were negative. Dogs >1 year of age were more likely to be positive for hemoplasmas ( p= 0.0014). In conclusion, although canine hemoplasma infection was highly prevalent, cross-species hemoplasma transmission was not observed, and therefore may not frequently occur despite overexposure of agents and vectors.

RESUMOOs objetivos deste estudo foram determinar a prevalência de hemoplasmas numa população restrita de cães, equinos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos em assentamento rural brasileiro; identificar as espécies de carrapatos parasitando cães e equinos, e analisar os fatores associados à infecção. Amostras de sangue de 132 cães, 16 cavalos e 100 humanos foram avaliadas utilizando um protocolo pan-hemoplasma em PCR quantitativas em tempo real (qPCR) com SYBR green, seguido de qPCR TaqMan espécie-específicos. Cinquenta e nove/132 (44,7%) cães foram positivos para hemoplasmas (21 Mycoplasma haemocanis, 12 ' Candidatus Mycoplasmahaematoparvum' e 21 para ambos). Uma amostra humana do total de 100 (1%) foi positiva pelo qPCR SYBR green, mas os genes 16S rRNA ou 23S rRNA não foram amplificados com sucesso, apesar de inúmeras tentativas. Todas as amostras de cavalos foram negativas. Cães > 1 ano apresentaram mais chance de serem positivos para hemoplasmas ( p= 0,0014). Concluindo, embora infecções por hemoplasmas caninos sejam altamente prevalentes, a transmissão de hemoplasmas entre espécies não foi observada, e desta forma podem não ocorrer de forma frequente apesar da alta exposição aos agentes e vetores.

Occurrence and risk factors assessment associated with Mycoplasma gallisepticum (MG) infection in chickens in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Ocorrência e fatores de riscos associados à infecção por Mycoplasma gallisepticum em galinhas na região Semiárida do estado de Pernambuco

The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma gallisepticum (MG) infection and risk factors of this disease in three hundred serum samples from on 23 familiar agricultural properties in the semiarid region of the state of Pernambuco, Brazil. ELISA was used to study antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum. The univariate analysis (chi-squared test or Fischer's exact test) followed by multivariate analysis (logistic regression) were used to assess the risk factors with two variables: management and sanity of the poultry. It was detected a frequence of 53.33% (157/300) of the birds were positive for MG, with 100% foci. The risk factors confirmed by multivariate analysis, in the present study, were the presence of other poultry species on the property, including Numida meleagris (OR=2.22; p=0.005), parrots (OR=1.72; p=0.027), and of passerines (OR=1.88; p=0.007). These results showed that Mycoplasma gallisepticum infection is endemic among backyard poultry in the semiarid region of the state of Pernambuco. These birds could be a source of infection for other wild or domestic poultry. . This is the first report of the occurrence of avian mycoplasmosis in backyard poultry in the state of Pernambuco in northeastern Brazil. The risk factors identified should serve as a parameter for the health authorities to seek solutions related to controlling the disease.

Objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de infecção por Mycoplasma gallisepticum (MG) e os fatores de risco dessa doença em trezentas amostras de soro sanguíneo de galinhas domésticas em 23 propriedades da agricultura familiar na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum utilizou-se o Ensaio Imunoenzimático (ELISA). A análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida pela análise multivariada (Regressão Logística) foram utilizadas para avaliar os fatores de risco com duas variáveis: manejo e sanidade das aves. Foi detectada uma frequência de 53,33% (157/300) de aves soropositivas para MG com 100% de focos. Os fatores de risco confirmados na análise multivariada, neste estudo, foram a criação de outras espécies de aves na propriedade como Numida meleagris(OR=2,22; p=0,005), criação de diferentes espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Estes resultados demonstram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum é endêmica entre galinhas de criação doméstica na região semiárida do estado de Pernambuco. Estas aves podem atuar como fonte de infecção para outras aves silvestres e domésticas. Este é o primeiro relato da ocorrência de micoplasmose aviária em galinhas de criação doméstica no estado de Pernambuco, nordeste do Brasil. Os fatores de risco identificados devem servir como um parâmetro para as autoridades sanitárias buscarem soluções de controle da doença.

Recovery of Mollicutes from the reproductive tract of dairy cattle in the state of Pernambuco, Brazil / Recuperação de Mollicutes do trato reprodutivo de bovinos leiteiros no Estado de Pernambuco

The aim of the present study was to report the occurrence of members of the Mollicutesclass in the reproductive system of dairy cattle in Brazil. Five farms containing dairy cattle were visited in January of 2012. In total, 100 cows of different ages, breeds and stages of lactation were examined in the present study. The cows were part of intensive or semi-intensive management systems and were submitted to mechanical milking or hand milking. The samples were collected after washing the vulvar region with water and soap, and then drying it with paper towels and disinfecting the area with alcohol (70°GL). Vaginal mucous was collected using a sterile alginate cotton swab, which was rubbed on the vagina, as well as the lateral and internal walls. Vulvovaginal mucous samples were cultured in both liquid and solid modified Hayflick´s medium, for mycoplasmas, and UB medium, for ureaplasmas. The PCR assays for Mollicutesand Ureaplasmaspp. were performed according to the standard protocols described in the current literature. During isolation, the frequency of Mycoplasmaspp. was of 13.0% (13/100) and for Ureaplasmaspp. was of 6.0% (6/100). In the PCR assays the frequency of Mollicuteswas of 26.0% (26/100) and for Ureaplasmaspp. was of 13.0% (13/100) in the dairy cattle studied. This is the first report of these agents in reproductive system of bovine of the Pernambuco state. Further studies are necessary to determine the pathogenic potential and species of these field isolates.

O presente estudo relata a ocorrência de membros da Classe Mollicutesno sistema reprodutivo de bovinos leiteiros no Brasil. Foram visitadas em janeiros de 2012 cinco fazendas de bovinos leiteiros. Um total de 100 vacas de diferentes idades, raças e estágios de lactação foram examinadas. Os animais foram mantidos em sistema de manejo intensivo e/ou semi-intensivo, sendo submetidos aos sistemas de ordenha manual ou mecânica. As amostras de muco foram colhidas após a lavagem da região vulvar com água e sabão, com posterior desinfecção com álcool (70°GL). O muco vaginal foi colhido com suabe alginado estéril que foi friccionado nas paredes internas da vagina. Em seguida, as amostras foram cultivadas em meio Hayflick´s modificado, para micoplasmas, e em meio UB, para ureaplasmas, ambos caldo e placa. Os ensaios da PCR para Mollicutese Ureaplasmaspp. foram realizados de acordo com protocolo padrão descrito na literatura. No isolamento, a frequência de Mycoplasmaspp. foi de 13% (13/100) e para Ureaplasmaspp. foi de 6% (6/100). Nas reações da PCR a frequência para Mollicutesfoi de 26% (26/100) e para Ureaplasmas spp. foi de 13% (13/100) nos rebanhos bovinos leiteiros estudados. Este é o primeiro relato destes agentes no trato reprodutivo de bovinos no Estado de Pernambuco. Estudos adicionais são necessários para determinar as espécies e o potencial patogênico destes isolados de campo.

Molecular detection of hemotrophic mycoplasmas among domiciled and free-roaming cats in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, Brazil / Detecção molecular de micoplasmas hemotróficos em gatos domiciliados e errantes em Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, Brasil

Hemoplasmas are bacteria living in feline red blood cells. Feline hemoplasmosis is frequently associated with old male cats that have access to the streets. This study aimed to detect the presence of hemoplasma speciess in domiciled and free-roaming cats in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using molecular techniques. Between January 2013 and April 2013, EDTA-whole blood samples were collected from 151 domestic cats (65 free-roaming and 86 domiciled cats). Samples were subjected to PCR assays targeting hemoplasmas 16S rRNA, followed by sequencing, BLAST analysis and phylogenetic analysis. Results show an occurrence of 36.4% for hemoplasmas. Twenty-three cats (15.2%) were positive for ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’, 17 (11.2%) for M. haemofelis and 15 (9.9%) for ‘Candidatus M. turicensis’, from PCR. Coinfection by two or three hemoplasmas was found in 25 cats (16.6%). No statistically significant difference between genders or between lifestyles was observed for the presence of hemoplasmas among the cats. Results show different hemoplasma species are present in cat population (Campo Grande, MS, Brazil). It is suggested that a differential diagnosis for feline hemoplasmosis should be made when cats show nonspecific clinical signs of disease with systemic manifestation.

Hemoplasmas são bactérias encontradas aderidas aos eritrócitos de felinos. A hemoplasmose felina está frequentemente associada a gatos velhos machos, sem raça definida e com acesso à rua. O presente estudo objetivou realizar a detecção molecular de espécies de hemoplasmas em gatos domiciliados e errantes em Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul (MS), Brasil. Entre janeiro/2013 e abril/2013, amostras de sangue foram colhidas de 151 gatos domésticos (65 errantes e 86 domiciliados) e avaliadas por PCR frente à presença de sequências do gene do 16S rRNA de hemoplasmas, seguidas de sequenciamento, análise pelo BLAST e análise filogenética. Os resultados deste estudo mostraram uma ocorrência de 36,4%. Vinte e três (15,2%) gatos mostraram-se positivos na PCR para ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’, 17 (11,2%) para Mycoplasma haemofelis, e 15 (9,9%) para ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’. A co-infecção por dois ou três hemoplasmas ocorreu em 25 gatos (16,6%). Não foi observada diferença estatística significativa entre sexo e estilo de vida dos gatos amostrados e a presença de hemoplasmas. O estudo mostrou que diferentes espécies de hemoplasmas circulam na população de gatos (domiciliados e errantes) na cidade de Campo Grande, MS, Brasil. Sugere-se o diagnóstico diferencial para hemoplasmose felina em gatos que apresentam sinais clínicos inespecíficos de doença com manifestação sistêmica.

Mycoplasma agalactiae in semen and milk of goat from Pernambuco state, Brazil / Mycoplasma agalactiae em sêmen e leite de caprinos do estado de Pernambuco

In goat and sheep flocks, mycoplasmosis is a disease that may cause severe economical losses associated with polyarthritis, mastitis, agalactia, conjunctivitis, pneumonia and reproductive failure. The latter may involve repeat breeding, granular vulvovaginitis, infertility and abortions. The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma agalactiae (Ma) in semen and milk samples from naturally infected goat in the semiarid region from Pernambuco State, Northeast from Brazil. Thirty-nine semen samples and 81 milk samples were submitted to DNA extraction using a commercially available kit and following the manufacturer's instructions. The polymerase chain reaction (PCR) was then performed in accordance with protocols described in the literature. The results of the present study revealed the presence of Ma in the DNA of 17.9% (7/39) of the semen samples and 3.7% (3/81) of the milk samples. The results obtained in the present study confirm the elimination of the DNA of Ma in the semen and milk samples. The presence of this agent in goat flocks is considered very risky in terms of reproductive disorders and contagious agalactia outbreaks in the Northeast region of Brazil.

Em caprinos e ovinos as micoplasmoses causam sérias perdas econômicas associadas com poliartrites, mastites, agalaxia, conjuntivite, pneumonias e falhas reprodutivas. Esta última pode envolver repetição de cio, vulvovaginite granular, infertilidade e abortos. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae (Ma) em sêmen e leite de caprinos naturalmente infectados procedentes de regiões semiáridas do Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Foram usadas 39 amostras de sêmen e 81 de leite, as quais foram submetidas à extração do DNA genômico usando um kit comercial, seguindo as instruções do fabricante. A reação da PCR foi realizada de acordo com protocolo previamente descrito na literatura. Os resultados revelaram a presença de DNA de Ma nas amostras de sêmen com uma frequência de 17,9% (7/39) e no leite a frequência encontrada foi de 3,7% (3/81). Os resultados obtidos no presente estudo confirmam a eliminação de DNA de Ma nas amostras de sêmen e leite analisadas. A presença deste agente nos rebanhos caprinos pode ser considerada um risco para doenças reprodutivas e surtos de agalaxia contagiosa na região Nordeste do Brasil.